Protocolo reactivación de cepas ATCC

Las cepas ATCC son herramientas indispensables para el control de calidad en los laboratorios
microbiológicos, son microorganismos certificados utilizados en diferentes disciplinas, para el
control de calidad en microbiología.

Realice todo el proceso dentro de una cabina de seguridad biológica empleando medios de
protección personal (Guantes, mascarillas, mandil, etc.).

Las cepas podrán encontrarse en varias presentaciones, liofilizadas, en agar semisólido, en
medio de transporte (Los microorganismos liofilizados se deben hidratar para alcanzar la
viabilidad).

Materiales
Cajas de medios de cultivos (Agar de recuperación de la cepa, según el germen que vaya a
trabajar)
Asa de siembra
Caldo triptona soya o caldo nutriente estéril
Viales estériles con medio de cultivo para conservación (serán consideradas las cepas de
trabajo)

Procedimiento

Para cepas conservadas en liofilización
Tome el vial que contiene la cepa liofilizada conservada.
Desinfecte la tapa o borde con alcohol al 70%
Retirar la tapa y añadir lentamente (por la pared interna del frasco) solución fisiológica estéril
sin conservantes de acuerdo al volumen indicado en el rótulo, con jeringuilla estéril o pipetas
con puntas estériles.
Rotule la placa de agar a emplear. Añada varias gotas de la suspensión para inocular la placa
de agar.
Realice la siembra para obtener colonias aisladas (siembra por agotamiento).
Incube las cajas inoculadas a la temperatura y atmosferas óptimas para el desarrollo del
germen conservado.
Espere el tiempo de incubación indicado por el proveedor de la cepa.

Para cepas en medio semisólido
Tome el vial que contiene la cepa conservada en agar semisólido.
Desinfecte la tapa o borde con alcohol al 70%
Tome una asada del medio de conservación y añádala en un tubo con 1-2 ml de caldo de
cultivo estéril, mezcle bien y deje reposar por 30 minutos.
Tome varias gotas de la solución del tubo y páselos a las cajas de agar, siembre e incube en las
condiciones de temperatura y atmosferas óptimos para la cepa en cuestión.
Espere el tiempo de incubación indicado por el proveedor de la cepa.

Para cepas en medios de transporte
Tome el medio de transporte (hisopo) que contiene la cepa conservada.
Desinfecte la tapa o borde con alcohol al 70%
Pase el hisopo por 3 a 5 cajas de agar, óptimo para el desarrollo de la cepa a recuperar.
Siembre por agotamiento para obtener colonias aisladas.
Incube a la temperatura y atmosfera óptimas para el desarrollo de la cepa. Espere el tiempo de
incubación indicado por el proveedor de la cepa.
Una vez obtenidos los cultivos y antes de trabajar con las cepas para control de calidad o
investigación asegúrese de que están puras, aisladas y cumplen con las características de la
cepa ATCC estudiada.

Nota: Una vez confirmada la pureza y viabilidad de la cepa, podrá conservar en iguales
condiciones varias alícuotas de la cepa para posteriores trabajos. Nunca congele y descongele
el mismo vial. Solo realice hasta 6 pases del mismo vial para garantizar las características de la
cepa.