Experimentos con biofilms

Los experimentos se llevarán a cabo según lo publicado por Stepanovic et al 2007.

Medio para cultivar biofilms

Debería ser TSB, el cual contiene 0.25% de glucosa, suplementado con un 1% de glucosa adicional. Esta glucosa adicional mejora la formación de biofilms. Es importante anotar en M&M el proveedor de TSB utilizado pues esto influye.

Placa microtitulación

Es importante que tengan fondo plano. Asimismo es importante que sean siempre del mismo proveedor para mantener las condiciones constantes

Cultivo del biofilm

1    Si el inóculo es a partir de un cultivo líquido en fase postexponencial se diluye 1:100 en TSB+1%glucosa. Se añade 200 µl  por pocillo

Para minimizar los errores en la obtención de datos cada condición estudiada debe de realizarse por triplicado. Cada experimento debe de ser llevado a cabo de manera independiente tres veces. Siempre se debe de considerar un control negativo.

2    Se pone la tapa y se incuba aerobicamente durante 24 hrs a 37ºC sin agitación.

Lavado

Después de incubar, el contenido de los pocillos se absorbe con la bomba de vacío. Se lava cada pocillo con 300 µl de PBS pH 7.2 a 37ºC de temperatura. Se utiliza la pipeta multicanal. Después se elimina el el PBS de la siguiente manera:

Performing the Plate Flick

Teñido con violeta cristal

How to stain biofilms in a 96-well plate

Cuantificación de la biomasa de biofilms

Inhibición de la formación del biofilms por efecto de antimicrobianos

Erradicación de biofilms por efecto de antimicrobianos

Stepanović S, Vuković D, Hola V, Di Bonaventura G, Djukić S, Cirković I, Ruzicka F. Quantification of biofilm in microtiter plates: overview of testing conditions and practical recommendations for assessment of biofilm production by staphylococci. APMIS. 2007 Aug;115(8):891-9. doi: 10.1111/j.1600-0463.2007.apm_630.x. PMID: 17696944.

Broth Microdilution assay - How to determine the MIC (Minimum Inhibitory Concentration)