Extracción de ADN: prácticas de laboratorio

El proceso general de extracción de ADN consiste en: lisis de la pared celular y las membranas plasmáticas; liberación del ADN del núcleo de la célula; y finalmente eliminación de las las proteínas (nucleasas) que puedan degradar el ADN. La lisis se lleva a cabo en una solución salina, con detergentes para desnaturalizar las proteínas estructurales y permitir la liberación de los ácidos nucleicos del núcleo. Posteriormente, las proteínas celulares deben ser eliminadas, mediante la adición de proteasas y centrifugación para precipitar los demás componentes celulares. Finalmente, al añadir alcohol a la muestra, el ADN se suspende y puede ser recogido con una varilla de vidrio

Materiales:

Caja con hielo
pipetas pasteur plástico 1 mLgradilla plástica
embudos de plástico
tubos falcon 15 mL
papel filtro calidad 12,5 mn 615
tubos de ensayo pequeños 10 mL vasos de precipitación 400 mL

varilla de vidrio 25cm
mortero con pistilo
tubos eppendorf 1,5 mL

Reactivos:
10 mL. detergente líquido
1 L. de agua destilada
85 gr. de NaCl
30 mL. de zumo de piña
50 mL. de etanol frío
50 g. de guineo u otro vegetal

Método
1    Triturar bien y rápidamente en el mortero aproximadamente 50 gramos de guineo u otra muestra vegetal (por 15-20 segundos).
2    Mezclar la muestra con 100 mL. de agua destilada.
3    Añadir 9 gr. de NaCl y remover la mezcla.
4    Colocar el papel filtro en un embudo dentro de un vaso de precipitación.
5    Colocar la mezcla sobre el papel filtro dentro del embudo para filtrarla. Con la pipeta Pasteur tomar 10 mL. del líquido filtrado y transferir al tubo falcon.
6    En el tubo falcon añadir al filtrado 1mL. de detergente líquido.
7    Añadir 3 mL. de jugo de piña.
8    Tapar el tubo falcon y colocar en el agitador de tubos.
9    Mezclar la solución en el agitador de tubos durante 5 a 10 minutos sin generar espuma.
10    Retirar el tubo del agitador. Usando una pipeta Pasteur transferir 10 mL. de la fase inferior de la mezcla a un tubo de ensayo limpio.
11    Con una pipeta Pasteur ir agregando hasta 5mL. de etanol frío dejando resbalar suavemente el etanol por las paredes del tubo cuidando de no agitar el etanol con la muestra. Dejar reposar unos 15 segundos y observar que en el límite entre el filtrado y el etanol comenzará a aparecer el ADN.
12    En un tubo Eppendorf colocar 1mL de agua destilada.
Con una varilla de vidrio rotar suavemente para sacar el ADN y transferir al tubo Eppendorf para disolver el material genético

Aspecto algodonoso del ADN después de la extracción

Cuantificación ADN por espectrofotómetría

Cuantificación de ADN por absorbancia UV paso a paso

Cromatografía en gel de agarosa

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Referencias:

https://www.aulagenyca.com/extraccion-casera-de-adn/