Práctica infecciones del tracto gastrointestinal

El tracto gastrointestinal alberga una población compleja y dinámica de microrganismos (bacterias, virus, hongos y parásitos conocida actualmente como microbiota del tracto gastrointestinal). Las interacciones entre la microbiota y el hospedador son responsables de los estados de homeostasis o enfermedad. Uno de los grupos bacterianos, más estudiados y abundantes en el intestino es la familia Enterobacteriaceae. Se trata de bacilos Gram negativos, mesofílicos, no fastidiosos, que tienen la capacidad de reproducirse fácilmente en agua y alimentos. Por lo tanto, el acceso a estos microorganismos principalmente ocurre por vía digestiva. No todas las enterobacterias son patógenos estrictos, pero aquellas que sí lo son incluyen a Salmonella, Shigella y serovariedades de Escherichia (ETEC, STEC, EHEC, por mencionar algunas). Generalmente Klebsiella, Enterobacter y Proteus son enterobacterias que pertenecen a la microbiota normal del tracto gastrointestinal, pero que bajo condiciones adecuadas (ingreso a otros tejidos o adquisición de factores de virulencia) pueden causar enfermedades localizadas o sistémicas.

La gastroenteritis bacteriana es una enfermedad muy frecuente tanto en países desarrollados como en aquellos en vías de desarrollo. A pesar de que la mayoría de las gastroenteritis son autolimitadas, es decir, de origen vírico. Por ese motivo, ante un caso de diarrea se debe observar al microscopio para observar si hay leucocitos en las muestras fecales. Si existen leucocitos entonces sospechamos una diarrea originada por patógenos bacteriano y procedemos a sembrar en medios selectivos para obtener colonias de la bacteria causante de la diarrea. El estudio de una muestra de heces fecales ayuda a identificar el agente causal cuando hay síntomas de enfermedad invasiva, diarrea prolongada, diarrea crónica o enfermedad grave. Por lo tanto, el cultivo de heces es una herramienta importante para entender la microbiología de enfermedades gastrointestinales. Además, el entendimiento y mapeo de un brote de gastroenteritis tiene como base la caracterización de los agentes etiológicos involucrados.

La prueba de la oxidasa es a los Gram negativos lo mismo que la catalasa a los Gram positivos. Toda la familia Enterobacteriaceae son oxidasa negativos excepto el género Plesiomonas que pertenecen a los Enterobacteriaceae pero son oxidasa positivo. Las Plesiomonas no son patógenos estrictos por lo que no nos debemos preocupar de este género.

Ejemplos de problemas gastrointestinales provocados por bacterias

Las infecciones gastrointestinales se pueden producir por multiples patógenos. Las aves son reservorios de Salmonella spp, por ese motivo NUNCA LAVES EL POLLO, ya que ayudas a que la bacteria se esparza por tu cocina. Las bacterias se mueren cuando se cocinan.

Hay toxinas termoresistentes que no se eliminan con la cocción

Salmonella typhi causan diarrea a veces, otras incluso estreñimiento, pero pueden diseminarse por el torrente sanguíneo. Si sospechamos de fiebre tifoidea tenemos que analizar el coprocultivo.

Shigella disenteriae, es importante en los niños pequeños que puede provocar problemas neurológicos

Objetivos
Estrategias metodológicas para el diagnóstico de infecciones gastrointestinales, tomado en cuenta la correcta toma de muestra, transporte, procesamiento e interpretación de resultados .

Alcance
La práctica cubre desde la obtención de una muestra de calidad (heces), transporte, procesamiento hasta el reporte e interpretación de resultados.

Requisitos previos a la realización de la práctica
Leer de manera comprensiva la prácticas: tinción Gram, toma de muestras, y sobre todo siembra, aislamiento y caracterización de bacterias.
Leer y traer impreso a la práctica el manual de usuario de los cassettes de pruebas bioquímicas en micrométodo Microgen GNA

Aparatos, equipos e instrumentos
Microscopio binocular, mechero Bunsen e incubadora

MEDIOS.

Cajas bipetri Agar MacConkey

El medio MacConkey impide que crezcan bacterias Gram + y sirve para distinguir bacterias Gram - que fermenten o no la lactosa: A Colonias Lac - B colonias Lac +

Tubos de medios

1 Caldo MR-VP (caldo rojo de metilo) 2 Agar Base Urea 3 Agar Hierro lisina 4 Agar Citrato de Simmons 5 Agar SIM  6 Agar TSI

Cassettes de pruebas bioquímicas Microgen GNA

Recursos adicionales

Cajas bipetri de Agar nutritivo con 2 cepas bacterianas patógenas gastrointestinales

(Cepa 1 y Cepa 2) 

Cajas bipetri con agar Salmonella Shigella con Cepa 1 y Cepa 2 

SESIÓN 1

Se inocula con aguja los medios TSI, SIM y hierro Lisina. Para inocular los medios urea, citrato, MR-VP usamos el asa de inoculación.

Micrométodo GNA: Se toman 3 colonias aisladas de una de las cepas bacterianas y colocarla en un tubo con solución salina (3ml). A partir de esta suspensión colocar 3 gotas de la solución salina en cada uno de los pocillos del cassette Microgen. En todos los pocillos con línea negra colocar 1 gota de aceite mineral (parafina). Se vuelve a cerrar los pocillos con el parafilm que quitamos al principio. Incubar 24 horas a 37°C.

SESIÓN 2

Fermentación de la lactosa: Observar los resultados de las siembras en agar Mac Conkey.

Prueba oxidasa: Con un palillo de dientes, recoger una colonia aislada y esparcirla sobre la tira de oxidasa. Reporte sus observaciones.

Tinción Gram: usando bacterias de la siembra realizada en agar Mac Conkey.

Batería química convencional: Colocar reactivo de Kovacs en el medio SIM. Dividir el caldo de cultivo MR-VP en 2 tubos. a. En el primero colocar reactivo MR. b. En el segundo tubo colocar el reactivo VP 1 y reactivo VP 2. Finalmente, registrar los resultados de la batería química convencional (TSI, SIM, urea, citrato, MR-VP, lisina).

Micrométodo – Microgen GNA: Colocar los siguientes reactivos: Reactivos de Kovacs en el pocillo 8. Reactivo VP 1 Reactivo VP2 en el pocillo 10. Reactivo TDA en el pocillo 12. Revelar en el tiempo adecuado según el inserto de Microgen. Ingresar el código en el software e interpretar los resultados

Datos a ser registrados y el método de análisis y de presentación de resultados. Usar la Tabla de interpretación de resultados de la batería bioquímica para enterobacterias para la realización del informe de laboratorio. Organizar los resultados de la batería bioquímica convencional, agar MacConkey, test de oxidasa y tinción Gram en una tabla. Incluir dibujos de los resultados en la tabla de interpretación de resultados de la batería bioquímica para enterobacterias

Dibujar el cassette de reacciones Microgen con los resultados obtenidos en la práctica.

Con los resultados obtenidos identificar hasta género (y si es posible, hasta especie) el microorganismo

de la Cepa 1 y de la Cepa 2.

CUESTIONARIO

PREGUNTA 1: ¿Por qué se inocula con aguja los medios TSI, SIM y hierro Lisina? ¿Qué ocurriría si se utilizase un asa de siembra?

PREGUNTA 2: ¿Cómo siembro el agar TSI? ¿Por punción o estrías? ¿Como siembro el agar SIM?

PREGUNTA 3: Cuando siembro agar SIM ¿Qué respuestas nos va a dar el crecimiento en este medio?

PREGUNTA 4: Cuando siembro agar TSI ¿Qué respuestas nos va a dar el crecimiento en este medio?

PREGUNTA 5: Las pruebas de oxidasa se realizan tomando las colonias con un palillo ¿Por qué?

PREGUNTA 6: ¿Por qué no hacemos la prueba de la catalasa cuando tenemos un bacilo Gram negativo?

PREGUNTA 7: ¿Cómo consigue el medio MacConkey evitar que crezcan las bacterias Gram positivas?