Práctica antibiograma

Los antibióticos sólo deben de matar bacterias

¿Qué podemos hacer para combatir la resistencia a los antibióticos?

Cómo la avicultura india está creando superbacterias globales

El problema de las resistencias a los antibióticos (también en Ecuador)

Prueba de sensibilidad antimicrobianos. Método de Kirby Bauer
El descubrimiento de sustancias para controlar el crecimiento y reproducción bacteriana fue un evento revolucionario para la terapéutica médica. Sin embargo, el uso de agentes antimicrobianos promovió la selección de aquellas poblaciones bacterianas que lograron desarrollar mecanismos para evitar los efectos nocivos que estas sustancias provocan. Los mecanismos de resistencia a los antibióticos están determinados por cambios genéticos que se transmiten entre las poblaciones bacterianas de forma vertical (a las siguientes generaciones) y de forma horizontal (entre poblaciones de la misma generación a través, principalmente, de la conjugación). Es así que la resistencia a antibióticos es uno de los principales problemas a los que se enfrentan los sistemas de salud a nivel mundial. Los médicos tienen la responsabilidad de seleccionar y usar los medicamentos antibióticos más apropiados basando su decisión en el conocimiento integral de la problemática. Por esto, es fundamental que el estudiante de medicina conozca los principios y técnicas que permiten determinar si una población bacteriana es sensible o resistente a los antibióticos. Estas técnicas se conocen como pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos Kirby Bauer

Objetivos de la práctica

1. Conocer el procedimiento para realizar una prueba de difusión en disco.
2. Identificar las variables que pueden influir en los resultados de una prueba de difusión en disco.
3. Interpretar los diámetros de la zona de inhibición como sensible, intermedio o resistente
para cada bacteria basados en las recomendaciones del CLSI.

Adicionalmente, los docentes explicarán dos conceptos: 1. las betalactamasas de espectro extendido y el efecto de coadyuvantes para mejorar la farmacodinámica del antibiótico. Es lo que se conoce como prueba de  BLEE. 2. Resistencia inducible a macrólidos

Alcance
Esta práctica cubre desde la preparación del inóculo hasta la interpretación de los resultados
obtenidos en el antibiograma, caracterizando a las poblaciones bacterianas analizadas como
susceptibles o resistentes a los diferentes antibióticos probados.

Aparatos, equipos, materiales y reactivos

Mechero bunsen, incubadora 37ºC, turbidímetro calibrado.

 

Descripción del procedimiento

Se realizarán tres experimentos:

Prueba de difusión en disco (Kirby Bauer).  Esto es el experimento que realizarán los aliumnos. Cultivos bacterianos en placas Petri con Agar Nutritivo (Escherichia coli y Staphylococcus). En el cultivo de E. coli se colocarán discos de los siguientes antibióticos: ampicilina/sulbactan; ampicilina; cefazolina, ciprofloxacina y gentaminican. En el cultivo de S. aureus se colocarán los discos de trimetopim/sulfametoxazol; eritromicina; clindamicina, doxiciclina y cefoxitina.

Prueba de  BLEE. Para ello, los docentes cultivarán Mueller Hinton con Klebsiella productora de BLEE con discos de amoxicilina/ácido clavulánico, ceftazidime, cefepime, ceftriaxona, cefotaxima.

Prueba D (D-test). Para ello, los docentes cultivarán en Mueller Hinton (MH)  Staphylococcus aureus meticilina resistente con discos de cefoxitina, eritromicina y clindamicina. 

SESIÓN 1

1. De cada cultivo bacteriano (un cultivo de E. coli y otro cultivo de Staphylococcus aureus), seleccionar 1 colonia, con el asa

bacteriológica con mucho cuidado tomar la colonia y disolverla en un tubo que contenga

2mL con solución salina al 0.9%.

2. Ajustar la turbidez al estándar McFarland 0.5 en el Turbidímetro hasta alcanzar la

concentración deseada (0.5 McFarland).

3. Introducir un hisopo estéril en el tubo con solución 0.5 McFarland, eliminar el exceso del

líquido en las paredes del tubo, posterior inocular la superficie del agar MH con el hisopo

sobre toda la superficie de agar (I); gire la placa aproximadamente 60 grados y repetir el

procedimiento por 2 ocasiones más (II y III), tomar en cuenta que se debe cubrir toda la

superficie del agar para garantizar una distribución uniforme del inóculo. Para finalizar la

inoculación pasar el aplicador por la periferia del medio de cultivo (IV).

Minuto 2:20 a 2:55 método de siembra

4. Permitir secar el medio por un lapso de 3 a 5 minutos y no más allá de 15 minutos.

5. Colocar los discos de antibióticos sobre el agar con una pinza estéril previamente

flameada. Oprima los discos suavemente con la pinza para asegurar un buen contacto

con el medio de cultivo. Los discos deben estar espaciados de manera que su distancia

a la pared de la placa sea de 15 mm y entre ellos de 20 a 30 mm.

6. Incube en aerobiosis a 37°C-24 horas.

Recursos adicionales:

Evolución de la Resistencia a Antibióticos

 https://hms.harvard.edu/news/bugs-screen

 Experimento que muestra la progresión hacia la resistencia de los antibióticos de las bacterias, mostrando rutas diferentes para cumplir el objetivo.

Mónica Cartelle nos explica que es la resistencia a antibióticos

parte 2

parte 3

parte 4

Método Kirby-BauerURL 

 

ID Laboratory Videos - Antibiotic Susceptibility Testing

Método E-TestURL 

Actividad: Susceptibilidad AntimicrobianaURL 

 https://learn.chm.msu.edu/vibl/content/antimicrobial.html#

Actividad en línea. La página usa aplicación Flash para funcionar. Una vez terminado el ejercicio con la primera caja petri, seleccionar RESTART para volver a realizar el ensayo con otra bacteria.