martes, 1 de diciembre de 2020

Resultados práctica antimicrobianos

SESIÓN 2

Se analizaron los resultados de los tres experimentos realizados:

1 Prueba de difusión en disco (Kirby Bauer). Cultivos bacterianos en placas Petri con Agar Nutritivo (Escherichia coli y Staphylococcus). En el cultivo de E. coli se colocarán discos de los siguientes antibióticos: ampicilina/sulbactan; ampicilina; cefazolina, ciprofloxacina y gentaminican. En el cultivo de S. aureus se colocarán los discos de trimetopim/sulfametoxazol; eritromicina; clindamicina, doxiciclina y cefoxitina.

    1. Realice meticulosamente la medición en milímetros de los halos de inhibición de los diferentes antibióticos. Para ello coloque la regla sobre cada uno de los discos por el reverso de la placa, determinando en cada caso el tamaño del diámetro del halo.

    2. Identifique el antibiótico y su concentración y escriba en su cuaderno la medida en mm obtenida para cada uno.

    3. Compare los resultados por usted obtenidos con los datos que se ofrecen en las tablas de referencia para la determinación de las categorías de susceptibilidad por métodos de difusión y determine la categoría de susceptibilidad correspondiente a cada antibiótico.

    4. Informe, analice e interprete los resultados.

Datos a ser registrados y el método de análisis y de presentación de resultados.

El estudiante obtendrá datos cuantitativos (longitud en mm de halos de inhibición de crecimiento bacteriano) los cuales serán traducidos a valores cualitativos (sensible, intermedio, resistente), caracterizando a la población bacteriana. Estos resultados deberán ser presentados en una tabla que deberá ser debidamente confrontada con información estandarizada para cada antibiótico y para cada bacteria. La información previa está basada en el manual del CLSI. Además, deben analizar e interpretar los resultados.

Tabla de registro de antibiograma 




La producción de betalactamasas es uno de los principales mecanismos de resistencia bacteriana. Las betalactamasas son enzimas capaces de inactivar los antibióticos de la familia betalactámicos (penicilinas, cefalosporinas, monobactámicos y carbapenémicos).
BLEEs (Clase 2be): Las mutaciones de los genes que codifi can beta lactamasas TEM-1, TEM-2 y SHV-1 se han vuelto comunes en aislamientos de E. coli, Klebsiella pneumoniae y otros bacilos gram-negativos incluyendo Burkholderia cepacia, Capnocytophaga ochracea, Citrobacter spp. Enterobacter spp., Morganella morganii, Proteus spp., Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp., Serratia marcescens y Shigella dysenteriae. Estas mutaciones resultan en la producción de beta-lactamasas conocidas como beta lactamasas de espectro extendido o BLEEs.
Propiedades de las BLEEs: Las BLEEs hidrolizan todas las penicilinas, aztreonam y todas las cefalosporinas pero no las cefamicinas como la cefoxitina y cefotetan. Los genes de BLEE se encuentran comúnmente en plásmidos transmisibles que por lo general codifican otros determinantes de resistencia (eje., aminoglucósidos o trimethoprim/sulfamethoxazol). Las BLEEs son inhibidas por inhibidores beta lactamasa como el ácido clavulánico.


Estrategia de Prueba – BLEEs: El tratamiento de la bacteriemia causada por organismos productores de BLEE con cefalosporinas de espectro extendido (eje., ceftazidima) puede resultar en un fracaso clínico. Por ende, es imperativo detectar y confirmar la presencia de BLEEs en todas las E. coli y Klebsiella spp.

 Mueller Hinton con Klebsiella productora de BLEE con discos de antibiograma: C amoxicilina/ácido clavulánico E cefepime, B ceftriaxona, A cefotaxima,. D aztreonam. El disco de aztreonam debería de tener un halo asimétrico por efecto del clavulánico pero al estar muy separado del disco C no se observa. Este es un error típico.

 Mueller Hinton con Klebsiella productora de BLEE con discos de antibiograma: A CTX  cefotaxima cefalosporina 3 generación B  CRO ceftriaxona cefalosporina 3 generación C FEP  cefepime cefalosporina 4 generación D AMC amoxicilina/clavulánico  E CAZ ceftazidima, cefalosporina de 3 generación, considerado antibiótico estratégico, pues es de los que se protegen del uso indiscriminado en el medio hospitalario.

Interpretación: Si un aislamiento produce un halo de inhibición menor o igual al diámetro del halo especificado en la tabla para uno o más de los agentes, se considera como potencial productor de BLEE.
La actividad de los beta-lactámicos de espectro extendido, incluyendo cefotaxima (A) y ceftazidima, contra las bacterias productoras de BLEE es restaurada en presencia de ácido clavulánico. Las bacterias productoras de BLEE deben ser reportadas como resistentes a todas las penicilinas, cefalosporinas (mas no cefoxitina o cefotetan) y aztreonam sin importar el resultado in vitro.

3 Prueba D (D-test)
Mueller Hinton (MH)  Staphylococcus aureus meticilina resistente con discos de C cefoxitina, B eritromicina y A clindamicina

En la página 8 de este documento se describen los fenotipos que se observan mediante difusión con discos son: 1) resistencia a la eritromicina y a la clindamicina; 2) resistencia a la eritromicina y sensibilidad a la clindamicina pero con un achatamiento del halo de la clindamicina en la proximidad de la eritromicina (Dtest positivo); 3) resistencia a la eritromicina y sensibilidad a la clindamicina sin achatamiento del halo (D-test negativo). En el primer caso se trata de resistencia constitutiva a la eritromicina y a la clindamicina (fenotipo cMLSB), en el segundo de resistencia constitutiva de expresión inducible (fenotipo iMLSB) y en el tercero de resistencia a la eritromicina mediada por una bomba de expulsión activa (fenotipo MSB).

 Izquierda: cepa de Staphylococcus epidermidis con resistencia a la eritromicina mediada por bomba de expulsión activa (D-test negativo). Derecha: cepa de S. aureus con fenotipo MLSB inducible (D-test positivo). 

Para los estreptococos beta-hemolíticosy su susceptibilidad a eritromicina y clindamicina, ver: Fuente Paho, página 148.

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