Práctica infecciones de vías urinarias

La presencia de microorganismos en las vías urinarias asociado a sintomatología clínica es definida como infección de vías urinarias (IVU), el hallazgo de sintomatología es fundamental ya que ayuda diferenciar de otra patología conocida como bacteriuria asintomática la cuál es considerada clínicamente relevante en casos puntuales como en mujeres embarazadas. Es importante definir si la infección urinaria es alta (pielonefritis) o baja (cistitis, prostatitis), así como si es de origen intrahospitalario (sospechar patógenos multirresistentes) o comunitario (optimización de antibióticos), Siendo relevante ya que se considera que entre el 50 a 60 % de mujeres adultas presentarán una IVU por lo menos un episodio en su vida.

Varios uropatógenos pueden infectar las vías urinarias y la prevalencia puede variar de país a país, en mujeres con cistitis comunitaria predomina Escherichia coli con una prevalencia entre 80 a 85 %, el porcentaje restante suele asociarse a Staphylococcus saprophyticus (cititis de luna de miel), Proteus mirabilis (asociado a litiasis renal), Streptococcus agalactiae (prevalente en mujeres embarazas, puede causar neumonías en neonatos) y especies de Klebsiella (importante por resistencia intrínseca a ampicilina, presencia de betalactamasas y carbapenemasas tornándola una bacteria resistente a antibióticos). Por otro lado, a nivel hospitalario diversos procedimientos (sonda urinaria, procesos quirúrgicos) predispone a infecciones por bacilos gramnegativos como Proteus, Klebsiella, Serratia y Pseudomonas.

Una cistitis debe ser descartada ante un paciente con dolor al orinar (disuria), aumento de la frecuencia urinaria (polaquiuria), mantener las ganas de miccionar pese al acto urinario (tenesmo), entre otros (hematuria, nicturia, incontinencia, etc). Se debe diferenciar de una pielonefritis, ya que la infección renal suele asociarse con fiebre, dolor a la puñopercusión lumbar y síntomas sistémicos. Posterior al diagnóstico clínico este debe ser corroborado con exámenes de laboratorio para lo cual se debe solicitar un examen elemental y microscópico de orina (EMO), además de un urocultivo y antibiograma.

Esta práctica se fundamentará en el análisis microbiológico de la orina para la detección de patógenos por medio del urocultivo. El urocultivo significativo (micción espontánea > 100.000 (UFC/mL) llega a ser de fundamental importancia debido a que ayuda a conocer la prevalencia local de patógenos, influye en la terapia antibiótica y motiva la decisión de cambio (rotar) del fármaco en aislados resistente o multirresistentes (resistencia a más tres familias de antibacterianos).

Objetivos de la práctica

1. Valorizar la importancia de la Tinción Gram en la instauración de terapia de antibióticos.
2. Conocer los puntos de corte para infección urinaria de acuerdo a sexo, edad, sintomatología y método de recolección de la muestra.
3. Determinar la importancia del examen elemental, físico-químico y microscópico de orina.
4. Analizar y determinar la importancia del crecimiento de uropatógenos en medios de
cultivo.
5. Aprender a utilizar la metodología adecuada para la realización de urocultivos.

Los resultados de la práctica: 

1. Tinción Gram.

2. Tira Combur-Test

3. Identificar morfología de colonias en agares CLED, Sangre y MacConkey.

4. Realizar el conteo de colonias del agar CLED y agares Sangre/MacConkey

5. Identificar morfología de colonias en demostrativo de agar cromogénico UTIC

Recursos adicionales • Muestra de orina por grupo, provista por los estudiantes. • Cultivos bacterianos en medio cromogénico UTIC con E. coli, Proteus spp, Klebsiella spp, Enterococcus spp, 

Descripción del procedimiento 

SESIÓN 1

1. Recolectar una muestra de orina fresca en un frasco estéril de boca ancha. La muestra no debe tener más de 2 horas de antigüedad. 

2. Sembrar con asa estéril de 10 uL de orina en cajas de agar. Sembramos las placas. Siempre desde el medio menos selectivo al medio más selectivo. Primero agar Sangre, agar MacConkey y agar CLED.

Usar técnica de estriado semicuantitativo que permita el contaje de colonias y obtener la densidad celular original (Original Cell Density, OCD). Mantener una técnica aséptica para evitar contaminaciones. 

En la siembra semicuantitativa siembro en Z por que parto de un inóculo pequeño (10ul). Primero se toma de la muestra de orina con un asa y siembro en el centro de la placa (siguiendo la flecha) y luego estrío de la manera indicada.

3. Realizar el test de parámetros de orina. Sumergir la tirilla por 1 minuto y anotar los resultados 

4. Transferir 5mL de muestra del frasco estéril a un tubo de ensayo estéril. 

a. Centrifugar a 3500 RPM por 5 minutos. 

b. Descartar 4 mL de sobrenadante tratando de no afectar sedimento. 

c. Realizar una tinción Gram del sedimento urinario.

SESIÓN 2

1. Identificar morfología de colonias en agares CLED, Sangre y MacConkey.

2. Realizar el conteo de colonias del agar CLED y agares Sangre/MacConkey. Calcular OCD
y reportarlo en CFU/mL.
3. Identificar morfología de colonias en demostrativo de agar cromogénico UTIC con cultivos
de E. coli, Proteus spp, Klebsiella spp, Enterococcus spp, Staphylococcus saprophyticus,
Streptococcus agalactiae.

Datos a ser registrados y el método de análisis y de presentación de resultados.

• Relacionar los datos obtenidos de la tirilla de parámetros físico-químicos de la muestra
de orina con la tinción Gram de sedimento de orina y el conteo de colonias realizado a
partir del cultivo semicuantitativo para determinar posibilidad de infección urinaria.

• Reportar características morfológicas de colonias en agares específicos CLED, Sangre,
MacConkey.

• Reportar características morfológicas de colonias en agares específicos UTIC.

CUESTIONARIO

PREGUNTA 1 ¿Por qué uso el agar CLED? ¿Qué componentes tiene? ¿Qué mejora el agar CLED con respecto al MacConkey para los urocultivos?

PREGUNTA 2: ¿Qué uropatógeno voy a aislar en agar sangre?

PREGUNTA 3: Medios cromogénicos ¿Qué son? ¿En qué se basan?

PREGUNTA 4: ¿Por qué sembramos las placas siempre desde el medio menos selectivo al medio más selectivo?

PREGUNTA 5: ¿Qué indica la presencia de nitritos en la muestra de orina?